全自动酶联斑点分析仪
德国biosys bioreader 7000系列—酶联斑点、荧光斑点、病毒斑 、克龙形成、种瘤细胞集落形成、赶细胞集落形成试验等分析金标准
酶联免一斑点分析仪可用于酶联免衣斑点实验结果分析,以及病毒斑、菌落、克笼斑等微生物斑点实验结果的分析。可以将单个细胞的分泌可视化。如通过IFN-r,白细胞介素,肿六坏死因子等,分析抗原特异性T淋巴细胞的反应性;也可以检测B淋巴细胞分泌抗题的情况,实现对T、B淋巴细胞功能的研究。显著的优势是高灵敏度,因为细胞的分泌在其周围被直接捕获防止了被稀释、浆解及被周边细胞的受体结合的影响。酶联免yi斑点实验方法敏感性、特异性和可重复性都很高,操作简单迅速,需要少量标本,在检测抗原特异性细胞数量的同时也反应其功能,并与临床结果相关。
T细胞的ELISpot分析应用:
ELISpot是研究特异性免疫反应的敏感方法,能够区分活化的T细胞亚群。例如,Th1细胞产生干扰素-γ、IL-2和TNF-α,而Th2细胞产生其他细胞因子,如IL-4、IL-5和IL-13。例如,这被广泛应用于infectious disease、cancer、过敏和自身免疫性疾病的研究。
在vaccine研究中,ELISpot是一种标准工具,用于通过测量激发强大T细胞反应的能力(通常是干扰素-γ的分泌)来确定vaccine的有效性。基于ELISpot的诊断分析已经可用,包括一种通过测量T细胞对tuberculosis分枝Bacillus特定抗原的反应分泌干扰素-γ来检测tuberculosis病感染患者的测试。
biosys bioreader 6000生产厂家原理biosys bioreader 6000生产厂家原理
将细胞置于包被有特异性Antibody的96孔板中培养,在有刺激的条件下,细胞分泌的细胞因子或免疫球蛋白会被包被Antibody捕获。移除细胞后,被capture的细胞因子可进一步使用生物素标记的二抗来标识,其后再与酶标记的亲和素作用,并加入底物使其呈色,有反应作用的细胞会留下直径大小不等的stained spots。
1. 加入细胞到含有(或不含)刺激物中培养;
2. 阳性细胞开始分泌细胞因子,细胞因子就近被包被Antibody捕获;
3. 移出细胞,清洗板子,加入生物素标记的检测Antibody,形成“Antibody-抗原-Antibody”夹心结构;
4. 为了观察膜上斑点的形成,加入酶标记的亲和素;
5. 加入显色底物,在酶的催化分解下,生成不可溶的色素,就近沉淀在局部的膜上形成斑点;
6. 斑点计数(可用bioreader自动读板仪计数),数据处理,结果分析。