冷冻干燥是将菌体悬浮液冷冻到冰点以下,从而转变为固体结晶态,然后在低温低压(真空)下使固体升华而脱水的干燥方法。一般干燥处理过程会破坏微生物的细胞膜,引起细胞的大量死亡,因此需要添加保护剂,能够使菌液密度均一,减少活菌在冻干过程中的机械效应和溶质效应带来的死亡。因此,在冻干前加入的保护剂配方就成为了至关重要的决定性因素,它既会影响到储存期细胞的活性以及稳定性,也会影响到复水时细胞存活率。
真空冷冻干燥法保存菌种的步骤主要包括:
1、微生物培养,培养获得健壮的菌种扩培液体。培养时根据菌种选择不同的培养基。培养到对数期获得大量健壮的菌种,保证菌体浓度,一般达到109的浓度.
2、离心收集菌体。通过离心法从液体培养基中获得菌体。如果是固体培养基可以直接收集菌落,用保护剂溶解混匀。
3、将菌体、脱脂奶粉、海藻糖、蔗糖等保护剂在无菌水中混匀得到含有保护剂的菌体混悬液。
4、分装。将菌体混悬液在无菌环境中分装到无菌容器中,可以是安瓿瓶、西林瓶、EP、培养皿等。
5、预冻,预冻是非常关键的。预冻不好,菌体会死亡。要快速预冻,防止产生大冰晶造成细胞死亡。预冻要冻结实,保证预冻充分。
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